培养条件：气相条件为95%空气与5%二氧化碳，培养温度设置在37℃。传代方法建议第一次按1:2比例进行传代，传代情况应在2天后更换培养液。此外，建议同时购买我们的培养基，享受独特的优惠。在收到细胞后，请勿立即开启瓶盖，及时核对培养瓶上标注的细胞名称是否与所订购的相符，以及是否有破损或漏液等异常。若未发现异常情况，可在显微镜下观察细胞生长状况，并拍摄不同倍数的照片保存（推荐40x、100x及200x各一张），前三天的照片将作为重要售后依据，若未提供照片则默认细胞状态良好。

对于贴壁细胞的传代步骤如下：

1. 弃去培养上清，使用不含钙、镁的PBS清洗细胞1-2次。

2. 添加约1-2ml的0.25%胰蛋白酶消化液至培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，观察细胞的消化状况；细胞大部分变圆并脱落时，迅速轻敲培养瓶并加入超过5ml的完全培养基以终止消化。

3. 轻轻吹打细胞，确保其完全脱落后，吸出细胞悬液并转移至15ml离心管中，在1000RPM条件下离心5分钟，弃去上清，补加1-2ml完全培养基重悬。

4. 按1:2比例将细胞悬液分瓶传代（两个T25瓶），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，最后放入37℃、5%CO2的细胞培养箱中培养。

悬浮细胞的传代步骤：

1. 半换液法：竖着放置培养瓶在培养箱静置1小时，轻轻吸掉约3ml的培养基，然后补充3ml的完全培养基。如果培养基颜色变化缓慢，可以直接添加约500µl的FBS。传代时可直接添加5ml的培养基分成两个培养瓶，一般这样传代约3次后即可进行一次离心传代，去掉死细胞。

2. 离心换液法：如需分瓶，将细胞悬液收集至离心管中，在1000RPM下离心5分钟，弃去上清，补加1-2ml培养液后重悬混匀，再按1:2的比例分到新的T25瓶中，添加6-8ml按照说明书要求配置的新完全培养基，以保证细胞生长活力，后续传代根据实际情况按1:2~1:5的比例进行。

细胞的冻存步骤：

1. 当细胞生长至覆盖培养瓶80%面积时，弃去T25培养瓶中的培养液，并用PBS清洗细胞一次。

2. 添加约1ml的0.25%胰蛋白酶消化液，观察至细胞收缩变圆后，加入5ml完全培养基终止消化，然后轻轻吹打使细胞脱落，悬液转移至15ml离心管中，在1000RPM离心5分钟。

3. 弃去上清，沉淀细胞后加入1ml的无血清冻存液（货号：C7001），混匀后转入冻存管中。

4. 将冻存细胞直接置于-80℃冰箱中，如需转入液氮罐，需在-80℃冰箱中存放超过24小时再转移。

细胞复苏步骤：

1. 从液氮中取出细胞冻存管，迅速置入37℃水浴中解冻，直至冻存管内无结晶后，用75%酒精擦拭冻存管外壁。

2. 将细胞移至含有5ml完全培养基的15ml离心管中，1000RPM离心5分钟。

3. 弃去上清，沉淀后用5ml完全培养基重悬，然后接种至T25培养瓶，放入37℃、5%CO2细胞培养箱中培养。

4. 第二天更换为新鲜完全培养基继续培养。

注意事项：

有些细胞在运输过程中可能会出现脱落的现象，这属于正常情况。如脱落现象明显，可将培养瓶中所有培养液 收集至离心管，1000RPM离心5分钟，收集上清作过渡培养。然后加入胰酶1-2ml，轻轻吹打再重悬，消化1-2分钟后，加入5ml完全培养基终止反应，随即进行离心，弃去上清后补加1-2ml完全培养基重悬。接下来按1:2比例进行分瓶传代（两个T25瓶），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，并最终放入37℃、5%CO2细胞培养箱中培养。

细胞问题重发情况：

如遇到细胞运输中的各种问题（如细胞丢失、瓶身破损及培养液严重泄漏等），需重发；

若在收到产品48小时内发现细胞污染，请提供真实实验结果以便确认；

常温发货细胞静置24小时后大多数细胞未存活（需提供真实清晰的细胞状态照片）可申请重发；

如干冰冻存发货的细胞复苏后24小时出现问题，需提供详细描述以申请重发；

若在收到细胞当天及其后的第2、3天拍照，若在4-7天内出现问题需提供收货前三天的照片及操作步骤，经过技术人员判断为我方责任可重发；如技术人员判断为双方责任，按合同价格的50%收取重发费用。

不予重发的情况：

若因客户造成的细胞污染、错误操作导致细胞状态不佳，或使用非推荐培养系统的情况均不予重发；未提供前三天照片的细胞状态不佳的，也不予重发；在2天内未通知出现的问题不予重发。此外，具体情况将根据实际而定。

尊龙凯时致力于提供高质量的细胞培养产品，为您的生物医疗研究保驾护航。